UBE2E3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423576

Übersicht

Ube2e3 kodiert das murine Ubiquitin-konjugierende Enzym UBE2E3, eine E2-Komponente des Ubiquitin-Proteasom-Systems, die Ubiquitin von E1-Enzymen auf E3-Ligasen überträgt und so den Proteinumsatz sowie Signalwege reguliert. Durch Ubiquitinierung trägt UBE2E3 zur Proteostase, zu Stressantworten und zur Kontrolle zellzyklus- und DNA-Schadens-assoziierter Signalwege bei, indem es die Stabilität von Substraten und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme beeinflusst. Als Modulator der Proteinkontrolle und regulativer Ubiquitin-Signalgebung kann eine veränderte UBE2E3-Aktivität die zelluläre Homöostase in für Neurobiologie, Entzündung und krebsassoziierte Phänotypen relevanten Kontexten beeinflussen. Die Untersuchung UBE2E3-abhängiger Ubiquitinierungsnetzwerke hilft zu verstehen, wie E2-Enzyme die Dynamik von Signalwegen und die Substratspezifität gewebsübergreifend feinabstimmen.

Das UBE2E3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ube2e3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ube2e3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ube2e3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UBE2E3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ube2e3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UBE2E3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ube2e3-Exone abzielen, die für die UBE2E3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ube2e3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UBE2E3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UBE2E3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ube2e3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UBE2E3 HDR-Plasmid (m) und UBE2E3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ube2e3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ube2e3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.