UBE2E2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406437

Übersicht

UBE2E2 kodiert ein E2-Ubiquitin-konjugierendes Enzym, das aktiviertes Ubiquitin von E1-Enzymen auf E3-Ligasen überträgt und damit die Ubiquitinierung von Substraten sowie die Proteostase unterstützt. Über seine Funktion im Ubiquitin-Proteasom-System beeinflusst UBE2E2 den Proteinumsatz, Stressantworten und die Regulation von Signalknoten, die von einer kontrollierten Ubiquitinierung abhängen. Eine veränderte Ubiquitinierungskapazität kann Signalwege beeinträchtigen, die den Zellzyklusverlauf und DNA-Schadensantworten steuern, und verknüpft eine Dysfunktion von UBE2E2 mit Phänotypen, die für onkogene Signalgebung und die zelluläre Homöostase relevant sind. UBE2E2 wird daher häufig als Modulator der ubiquitinabhängigen Regulation und als Bestandteil umfassender Netzwerke der Proteinkontrolle untersucht.

Das UBE2E2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UBE2E2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UBE2E2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UBE2E2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UBE2E2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UBE2E2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UBE2E2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UBE2E2-Exone abzielen, die für die UBE2E2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UBE2E2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UBE2E2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom UBE2E2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UBE2E2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UBE2E2 HDR-Plasmid (h) und UBE2E2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UBE2E2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UBE2E2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.