Type II 5-phosphatase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421136

Übersicht

Mouse Inpp5b codiert die Typ‑II‑5‑Phosphatase (INPP5B), eine Inositolpolyphosphat‑5‑Phosphatase, die Phosphatidylinositol‑4,5‑bisphosphat und verwandte Phosphoinositide hydrolysiert und dadurch die Signale von Membranlipiden mitgestaltet. Durch die Kontrolle lokaler PIP2‑Pools beeinflusst INPP5B phosphoinositidabhängige Signalwege, die an Endozytose, vesikulärem Transport und dem Umbau des Aktinzytoskeletts beteiligt sind, mit nachgeschalteten Effekten auf Rezeptorsignale und Membrandynamik. Die Funktion von INPP5B ist eng in die übergeordneten PI3K/PLC‑Signalnetzwerke eingebunden und überschneidet sich mit ziliären sowie Golgi‑assoziierten Transportprozessen. Eine fehlregulierte Phosphoinositid‑Umsetzung wird breit mit Störungen der zellulären Homöostase in Verbindung gebracht, wodurch Inpp5b ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu Signalgebung und Phänotypen des Membrantransports ist.

Das Type II 5-phosphatase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Inpp5b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Inpp5b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Inpp5b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Type II 5-phosphatase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Inpp5b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Type II 5-phosphatase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Inpp5b-Exone abzielen, die für die Type II 5-phosphatase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Inpp5b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Type II 5-phosphatase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Type II 5-phosphatase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Inpp5b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Type II 5-phosphatase HDR-Plasmid (m) und Type II 5-phosphatase HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Inpp5b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Inpp5b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.