Plasmide CRISPR d'Activation (h) twist: sc-400108-ACT

TWIST1 humain code la protéine Twist, un facteur de transcription bHLH (basic helix–loop–helix) qui orchestre les programmes de lignée mésenchymateuse et régule la transition épithélio-mésenchymateuse (TEM) via le contrôle transcriptionnel de gènes impliqués dans l’adhérence cellulaire, la motilité et le remodelage de la matrice extracellulaire. TWIST1 intègre des signaux issus de voies du développement et de réponse au stress, notamment les voies TGF-β, WNT/β-caténine et PI3K/AKT, afin de moduler la prolifération, la différenciation et la survie. Une activité dérégulée de TWIST1 est associée à une morphogenèse altérée et à des états aberrants de type TEM, fréquemment étudiés dans des modèles de progression tumorale, d’invasion et de métastases, ainsi que dans la fibrose et les phénotypes cellulaires de type « stem ». En tant que régulateur nodal de la plasticité transcriptionnelle, TWIST1 est largement utilisé pour explorer les réseaux de régulation génique qui gouvernent les transitions d’état cellulaire.

twist Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TWIST1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

twist Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TWIST1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TWIST1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de twist. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TWIST1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de twist au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie twist dans les cellules tumorales présentant une expression de TWIST1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.