Twinkle Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404159

Visão geral

TWNK codifica a Twinkle, uma helicase do DNA mitocondrial essencial para a replicação do mtDNA e para a manutenção dos nucleoides, atuando em conjunto com o replissoma mitocondrial para sustentar a capacidade de fosforilação oxidativa. Ao desenrolar o mtDNA de dupla hélice durante a replicação, a Twinkle ajuda a preservar o número de cópias do mtDNA e a integridade do genoma, influenciando a transcrição mitocondrial, a biogênese da cadeia respiratória e a homeostase energética celular. Alterações em TWNK estão ligadas à instabilidade do genoma mitocondrial, incluindo depleção de mtDNA ou deleções múltiplas, e estão associadas a fenótipos de doenças mitocondriais neuromusculares e neurodegenerativas. Estudos de perda de função de TWNK são, portanto, relevantes para investigar a sinalização de estresse mitocondrial, o remodelamento bioenergético e as respostas a danos no mtDNA associados à replicação.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Twinkle (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TWNK em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TWNK, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TWNK na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Twinkle.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TWNK para a investigação da sinalização de Twinkle, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TWNK críticos para a função Twinkle
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TWNK para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Twinkle Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Twinkle Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TWNK. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Twinkle Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Twinkle (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TWNK para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TWNK definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.