Plasmide CRISPR/Cas9 KO TWEAK (m): sc-423449

Présentation

Le gène murin **Tnfsf12** code **TWEAK** (TNF-like weak inducer of apoptosis), une cytokine transmembranaire de type II de la superfamille du TNF, pouvant être libérée sous forme de ligand soluble et signalant principalement via le récepteur **FN14/Tnfrsf12a**. L’interaction **TWEAK–FN14** régule des programmes géniques inflammatoires et le remodelage tissulaire en activant les voies **NF-κB** canonique et non canonique et en modulant la signalisation **MAPK**, influençant la survie cellulaire, l’apoptose, la prolifération, la migration et les réponses angiogéniques. Chez la souris, cet axe est impliqué dans les interactions entre cellules immunitaires et stroma ainsi que dans les réponses aux lésions, et il est fréquemment étudié dans des contextes d’inflammation chronique, de fibrose, de neuroinflammation et de remodelage du microenvironnement tumoral. Parce que TWEAK intègre la signalisation des cytokines aux processus de réparation, il constitue un nœud utile pour disséquer les interactions entre médiateurs inflammatoires et dynamique de la matrice extracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TWEAK (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnfsf12 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnfsf12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnfsf12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TWEAK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnfsf12 pour l'étude de la signalisation de TWEAK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnfsf12 essentiels à la fonction de TWEAK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnfsf12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TWEAK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TWEAK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnfsf12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TWEAK plasmide HDR (m) et le TWEAK (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnfsf12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnfsf12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.