TUTase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406803

Descripción general

El gen humano **TUT1** codifica la **uridililtransferasa terminal 1** (TUTasa), una polimerasa de ARN no canónica que cataliza la **uridilación en 3′** de diversos sustratos de ARN. Al modular la estructura del extremo 3′ del ARN, la TUTasa contribuye a la maduración y el recambio del ARN, influyendo en el metabolismo de las snRNA del espliceosoma y en una regulación génica postranscripcional más amplia. La uridilación dependiente de TUT1 se integra con vías de control de calidad del ARN que regulan la estabilidad de los ARN pequeños y de poblaciones seleccionadas de ARNm. La desregulación de los programas de adición de colas al ARN y de degradación en los que participa TUT1 se ha relacionado con estados de expresión génica alterados observados en el cáncer y en otros trastornos con procesamiento de ARN perturbado.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TUTase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TUT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TUT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TUT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TUTase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TUT1 para la investigación de la señalización de TUTase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TUT1 críticos para la función de TUTase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TUT1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TUTase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TUTase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TUT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TUTase (h) y el plásmido HDR TUTase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TUT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TUT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.