TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423540
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TTF/Transcription Termination Factor/TTF1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 Anticuerpo (A-5): sc-398968
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423540 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ttf1 (TTF1/factor de terminación de la transcripción 1) es una proteína de unión al ADN específica de secuencia que actúa como factor de terminación de la transcripción y como barrera para la horquilla de replicación en las repeticiones del ADN ribosómico (rDNA). En células de ratón, TTF1 ayuda a organizar la cromatina nucleolar, coordina la transcripción por la ARN polimerasa I con el procesamiento del rRNA y favorece la estabilidad del genoma al regular los conflictos entre replicación y transcripción del rDNA. A través de estas funciones, TTF1 contribuye a la homeostasis nucleolar y a la biogénesis de ribosomas, procesos estrechamente vinculados a la proliferación y a las respuestas celulares al estrés. La desregulación del control de la transcripción del rDNA y de la función nucleolar se asocia con frecuencia a programas de crecimiento oncogénico y a fenotipos más amplios de inestabilidad genómica, lo que convierte a Ttf1 en un objetivo relevante en estudios mecanísticos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ttf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ttf1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ttf1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TTF/Transcription Termination Factor/TTF1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ttf1 para la investigación de la señalización de TTF/Transcription Termination Factor/TTF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ttf1 críticos para la función de TTF/Transcription Termination Factor/TTF1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ttf1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ttf1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 (m) y el plásmido HDR TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ttf1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ttf1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.