TSHR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423527

Descripción general

Tshr codifica el receptor de la hormona estimulante de la tiroides (TSHR), un GPCR de hormonas glicoproteicas expresado principalmente en las células foliculares tiroideas, que transduce las señales de la TSH a través de Gs/adenilil ciclasa para aumentar el cAMP y activar programas transcripcionales dependientes de PKA. Este eje de señalización regula la biosíntesis de hormonas tiroideas, la captación de yoduro, el procesamiento de la tiroglobulina y el crecimiento y la diferenciación de las células foliculares. La actividad de TSHR se interconecta con las vías MAPK y PI3K para coordinar respuestas proliferativas y metabólicas aguas abajo de señales endocrinas. La desregulación de la señalización de Tshr está implicada en la enfermedad tiroidea autoinmune y en anomalías funcionales de la tiroides, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la señalización de GPCR, la homeostasis endocrina y la perturbación del receptor mediada por el sistema inmune en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TSHR (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tshr en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tshr junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tshr tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TSHR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tshr para la investigación de la señalización de TSHR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tshr críticos para la función de TSHR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tshr para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TSHR CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TSHR CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tshr. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TSHR (m) y el plásmido HDR TSHR (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tshr para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tshr definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.