Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
TRPV5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431458
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TRPV5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TRPV5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TRPV5 Anticuerpo (B-8): sc-398345
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TRPV5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-431458 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Trpv5 codifica TRPV5, un miembro altamente selectivo para el calcio de la familia de canales TRP vaniloides, que funciona como un canal epitelial apical de entrada de Ca²⁺. En el túbulo contorneado distal y el túbulo conector del riñón de ratón, TRPV5 sostiene la reabsorción transcelular de calcio y se integra con el amortiguamiento mediado por calbindina y la extrusión basolateral a través de NCX1 y PMCA, contribuyendo al mantenimiento de la homeostasis sistémica del calcio. La actividad del canal está modulada por la retroalimentación del Ca²⁺ intracelular, la señalización por fosfoinosítidos, el pH y reguladores hormonales como la vitamina D y la PTH, vinculando a TRPV5 con la señalización dependiente de Ca²⁺ y con programas de transporte epitelial. La desregulación del transporte dependiente de TRPV5 es relevante para estudios de hipercalciuria, susceptibilidad a la nefrolitiasis y fenotipos del metabolismo mineral en modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRPV5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trpv5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trpv5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trpv5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRPV5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trpv5 para la investigación de la señalización de TRPV5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Trpv5 críticos para la función de TRPV5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trpv5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TRPV5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TRPV5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trpv5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRPV5 (m) y el plásmido HDR TRPV5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trpv5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trpv5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.