TRPC5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423516
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- TRPC5 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im TRPC5-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TRPC5: sc-293259
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRPC5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-423516 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Trpc5 kodiert TRPC5, einen nichtselektiven Kationenkanal aus der Familie der „transient receptor potential canonical“-Kanäle, der als Antwort auf rezeptorvermittelte und lipidabhängige Signalübertragung einen Ca²⁺-Einstrom vermittelt. TRPC5 ist an PLC-abhängigen Signalwegen stromabwärts von GPCRs und Rezeptor-Tyrosinkinasen beteiligt und prägt damit die Membranexzitabilität, die intrazelluläre Calciumhomöostase sowie calciumabhängige Transkriptionsprogramme. In Mausmodellen wird TRPC5 breit in neuronalen sowie vaskulären/endothelialen Kontexten untersucht, wo es synaptische Funktionen, Neuritendynamik, mechanosensitive Antworten und redoxsensitive Signalgebung beeinflusst. Eine fehlregulierte TRPC5-Aktivität wurde mit Prozessen in Verbindung gebracht, die für Schmerzsignalgebung, angstähnliche Verhaltensweisen, vaskuläres Remodeling und Mechanismen von Nierenschädigung relevant sind, was seinen Einsatz in Modellen der Neurobiologie, kardiovaskulären Biologie und renalen Pathophysiologie unterstützt.
Das TRPC5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trpc5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trpc5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trpc5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRPC5-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trpc5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRPC5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Trpc5-Exone abzielen, die für die TRPC5-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trpc5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom TRPC5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TRPC5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trpc5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRPC5 HDR-Plasmid (m) und TRPC5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trpc5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trpc5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.