Tropomyosin γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401764
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Tropomyosin γ Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Tropomyosin γ-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Tropomyosin γ: sc-517613
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Tropomyosin γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401764 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
TPM3 kodiert das humane Tropomyosin gamma, ein aktinbindendes Coiled-Coil-Protein, das filamentöses Aktin stabilisiert und den Zugang von Myosinen sowie aktinassoziierten Faktoren zum Zytoskelett reguliert. Durch die Modulation der Aktinfilament-Dynamik trägt TPM3 zu Prozessen des zytoskelettalen Umbaus bei, darunter die Kontrolle der Zellform, Adhäsion, Migration und kontraktile Funktion. Tropomyosin-Isoformen helfen dabei, unterschiedliche Aktinfilament-Populationen zu spezifizieren, die mit Signalwegen verknüpft sind, welche die Mechanotransduktion und die Organisation von Stressfasern steuern. Eine veränderte TPM3-Expression oder Umlagerungen unter Beteiligung von TPM3 sind mit einer dysregulierten zytoskelettalen Architektur assoziiert und wurden in Kontexten wie onkogenen Fusionsereignissen und neuromuskulären Phänotypen beschrieben, wodurch TPM3 für die Untersuchung zytoskelettgetriebener Krankheitsmechanismen relevant ist.
Das Tropomyosin γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TPM3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TPM3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TPM3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tropomyosin γ-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TPM3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tropomyosin γ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf TPM3-Exone abzielen, die für die Tropomyosin γ-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere TPM3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Tropomyosin γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Tropomyosin γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TPM3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tropomyosin γ HDR-Plasmid (h) und Tropomyosin γ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TPM3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TPM3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.