Plasmide CRISPR/Cas9 KO tropomodulin 1 (m): sc-423427

Présentation

Le gène murin **Tmod1** code la **tropomoduline 1**, une protéine de coiffe de l’extrémité « pointue » des filaments d’actine, qui coopère avec la tropomyosine pour stabiliser les filaments et en définir la longueur dans des réseaux cytosquelettiques différenciés. En limitant l’échange de sous-unités d’actine aux extrémités pointues, Tmod1 contribue à l’organisation des myofibrilles, à l’architecture de l’actine associée à la membrane et au remodelage cellulaire dépendant de la tension. Ces fonctions placent Tmod1 au sein de voies qui gouvernent la dynamique du cytosquelette d’actine, l’assemblage du sarcomère et le contrôle de la forme cellulaire. Une régulation altérée de la stabilité des filaments d’actine est largement pertinente pour les études de la structure musculaire et des dysfonctions contractiles, ainsi que pour l’analyse de la contribution du cytosquelette à la motilité cellulaire et à la mécanobiologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO tropomodulin 1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tmod1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tmod1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tmod1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine tropomodulin 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tmod1 pour l'étude de la signalisation de tropomodulin 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tmod1 essentiels à la fonction de tropomodulin 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tmod1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le tropomodulin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le tropomodulin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tmod1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le tropomodulin 1 plasmide HDR (m) et le tropomodulin 1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tmod1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tmod1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.