TRM61 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408677-NIC

ヒトのTRMT61Aは、開始tRNAおよび伸長tRNAの58位にN1-メチルアデノシン（m1A58）を付加するtRNA m1A58メチルトランスフェラーゼ複合体の触媒サブユニットであるTRM61をコードする。この修飾は、tRNAの構造安定性、適切なアミノアシル化、そして正確な翻訳を支え、TRM61の活性をRNAプロセシング、プロテオスタシス、ならびに細胞のストレス応答と結び付けている。tRNA修飾経路の攪乱は、全体的な翻訳制御を乱し、モデル系において増殖異常や代謝ストレス／プロテオトキシックストレスに対する感受性の変化と関連づけられている。そのためTRMT61Aは、tRNAのエピトランスクリプトーム制御、リボソーム関連品質管理、そしてタンパク質合成の制御異常に結び付く疾患関連メカニズムの観点から研究されている。

TRM61 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TRMT61A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TRMT61A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TRMT61Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TRMT61Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。