TRIP13 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404006-ACT

TRIP13（thyroid hormone receptor interactor 13）はAAA+ ATPaseをコードし、有糸分裂および減数分裂における染色体動態を調節します。これには、スピンドルチェックポイントのシグナル伝達や、キネトコア–微小管の適切な結合の確立が含まれます。TRIP13は、主要なチェックポイント構成要素をリモデリングして正確な染色体分配を担保することで、細胞周期進行、エラー訂正、ゲノム安定性を制御する経路で機能します。TRIP13活性の異常は、さまざまな疾患状況で観察される異数性や染色体不安定性の表現型と関連づけられており、チェックポイント適応や増殖ストレスを研究するうえで有用な結節点となっています。ヒト細胞モデルでは、TRIP13の撹乱は、有糸分裂の監視機構とDNA損傷応答や複製関連不安定性を結びつけるメカニズムを解明するための、扱いやすい切り口を提供します。

TRIP13 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRIP13の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRIP13 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRIP13 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRIP13転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRIP13の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRIP13遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRIP13依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRIP13発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRIP13経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。