Plasmide CRISPR/Cas9 KO Trio (h): sc-401231

Présentation

TRIO code pour Trio, un grand facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) de la famille Rho, constitué de multiples domaines, qui active les GTPases Rac1 et RhoA afin de coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine, le trafic membranaire et la polarité cellulaire. Trio intègre les signaux provenant des récepteurs de surface cellulaire vers des voies en aval qui régulent la croissance des neurites, le guidage axonal et l’organisation des synapses, et joue également des rôles dans la migration et l’adhérence cellulaires. Une signalisation TRIO dérégulée, ainsi que des variants affectant l’activité GEF, ont été associés à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des altérations du fonctionnement du réseau des GTPases Rho dans divers contextes cellulaires, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier le contrôle du cytosquelette et l’intégration des signaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Trio (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRIO dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRIO, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRIO à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Trio.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRIO pour l'étude de la signalisation de Trio, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRIO essentiels à la fonction de Trio
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRIO pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Trio plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Trio plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRIO. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Trio plasmide HDR (h) et le Trio (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRIO pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRIO définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.