TRIM69 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404906

Übersicht

TRIM69 kodiert eine E3-Ubiquitin-Ligase der Tripartite-Motif-(TRIM)-Familie, die durch RING-, B-Box- und Coiled-Coil-Domänen gekennzeichnet ist, welche Protein-Protein-Interaktionen und ubiquitinabhängige Signalübertragung vermitteln. TRIM69 wurde mit der Regulation der angeborenen Immunität in Verbindung gebracht, einschließlich der Modulation interferon-stimulierter Signalwege und antiviraler Restriktionsmechanismen, indem es die Stabilität von Substraten und nachgeschaltete transkriptionelle Antworten steuert. Durch die Beeinflussung von Ubiquitinierung und Proteostase kann TRIM69 zelluläre Stressantworten und Signalnetzwerke prägen, die mit Entzündungsprogrammen verknüpft sind. Eine veränderte Aktivität von TRIM-Familienproteinen ist allgemein für Immunfehlregulation und onkogene Signalgebung relevant, wodurch TRIM69 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in diesen Kontexten darstellt.

Das TRIM69 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRIM69-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRIM69-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRIM69 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRIM69-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRIM69-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRIM69-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRIM69-Exone abzielen, die für die TRIM69-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRIM69-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRIM69 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TRIM69 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRIM69-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRIM69 HDR-Plasmid (h) und TRIM69 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRIM69-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRIM69-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.