Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM34 (h): sc-417920

Présentation

TRIM34 code une ligase E3 d’ubiquitine à motif tripartite appartenant à la famille TRIM, impliquée dans la régulation de l’immunité innée et la restriction antivirale. Par l’intermédiaire de ses domaines RING, B-box et coiled-coil, TRIM34 peut influencer la signalisation dépendante de l’ubiquitine et le renouvellement des protéines, modulant ainsi des voies telles que les réponses stimulées par l’interféron et la signalisation des récepteurs de reconnaissance des motifs. Une activité altérée des protéines de la famille TRIM est fréquemment associée à une inflammation dérégulée et à des interactions hôte–pathogène, ce qui fait de TRIM34 une cible pertinente pour l’étude des mécanismes qui modulent l’homéostasie immunitaire. TRIM34 est également utilisé comme régulateur candidat dans des analyses à l’échelle des systèmes portant sur la biologie des infections et les phénotypes de maladies associées à l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRIM34 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRIM34 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRIM34, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRIM34 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRIM34.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRIM34 pour l'étude de la signalisation de TRIM34, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRIM34 essentiels à la fonction de TRIM34
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRIM34 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRIM34 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRIM34 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRIM34. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRIM34 plasmide HDR (h) et le TRIM34 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRIM34 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRIM34 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.