Plásmido CRISPR de Activación (m) TREM-2: sc-429903-ACT

Mouse Trem2 codifica TREM-2, un inmunorreceptor enriquecido en la microglía y en otras células de linaje mieloide que favorece la supervivencia, la quimiotaxis y la eliminación fagocítica de lípidos y restos celulares. Mediante señalización dependiente de adaptadores (principalmente a través de TYROBP/DAP12), activa vías posteriores dependientes de SYK que moldean el tono inflamatorio, la detección de lípidos y la reprogramación metabólica. La actividad de TREM-2 modula las transiciones de estado de la microglía durante el daño tisular y la remodelación, y se estudia ampliamente en neuroinflamación y neurodegeneración, así como en la biología de los macrófagos en tejidos periféricos. La alteración de la señalización de TREM-2 se ha asociado con respuestas inmunitarias innatas desreguladas, depuración deficiente de detritos y cambios en programas transcripcionales de la microglía relevantes para la enfermedad.

TREM-2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Trem2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TREM-2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Trem2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Trem2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TREM-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Trem2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TREM-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TREM-2 en células tumorales con expresión de Trem2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.