TRC8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429220
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TRC8 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TRC8, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TRC8 Anticuerpo (H-9): sc-390347
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TRC8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-429220 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Rnf139 codifica TRC8, una ligasa E3 de ubiquitina de membrana multipaso asociada al retículo endoplásmico, que contiene un dominio tipo “RING finger”. TRC8 contribuye al control dependiente de ubiquitina de la estabilidad proteica, conectando el control de calidad de la membrana del RE y la regulación relacionada con esteroles y lípidos con vías más amplias de proteostasis. Mediante la modulación de la ubiquitinación y el recambio de sustratos selectos, TRC8 puede influir en el control del crecimiento celular, las respuestas al estrés y las redes de señalización coordinadas en el RE. La desregulación de la señalización por ubiquitina mediada por RNF139/TRC8 se ha investigado en el contexto de proliferación alterada y estabilidad genómica, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de vías asociadas a enfermedad en modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRC8 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rnf139 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rnf139 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rnf139 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRC8.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rnf139 para la investigación de la señalización de TRC8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Rnf139 críticos para la función de TRC8
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rnf139 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TRC8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TRC8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rnf139. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRC8 (m) y el plásmido HDR TRC8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rnf139 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rnf139 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.