Transketolase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423410

Descripción general

Mouse **Tkt** codifica la transcetolasa, una enzima dependiente de pirofosfato de tiamina que cataliza reacciones reversibles de transferencia de carbono en la rama no oxidativa de la vía de las pentosas fosfato. Al interconvertir fosfatos de azúcares, la transcetolasa favorece la producción de ribosa-5-fosfato para la biosíntesis de nucleótidos y ayuda a equilibrar los intermediarios de la glucólisis y de la vía de las pentosas fosfato para sostener las demandas celulares de redox y anabolismo. Por ello, la actividad de TKT se asocia con el metabolismo proliferativo, la adaptación mitocondrial y al estrés oxidativo mediante procesos dependientes de NADPH, y un control más amplio del flujo de carbohidratos. La alteración del direccionamiento de la vía de las pentosas fosfato y de la expresión de transcetolasa se ha vinculado con desregulación metabólica y fenotipos metabólicos asociados a tumores, lo que convierte a **Tkt** en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la remodelación metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Transketolase (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tkt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tkt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tkt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Transketolase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tkt para la investigación de la señalización de Transketolase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tkt críticos para la función de Transketolase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tkt para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Transketolase CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Transketolase CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tkt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Transketolase (m) y el plásmido HDR Transketolase (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tkt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tkt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.