TPPP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405957-ACT

ヒトTPPP（tubulin polymerization promoting protein）は、チューブリンに結合して微小管の重合および束化を促進する微小管関連因子をコードしており、細胞骨格の構築や細胞形態の維持に寄与します。TPPPはオリゴデンドロサイトに豊富に発現し、ミエリン鞘の形成および維持との関連が示されていることから、神経系における微小管ダイナミクス、細胞内輸送、分化プログラムを協調させる過程に関与する分子として位置づけられます。TPPPの発現異常や凝集は神経変性に関連する状況で報告されており、細胞骨格の安定性やタンパク質恒常性の破綻が神経細胞およびグリア細胞の機能に影響し得ることが示唆されています。これらの特性により、TPPPは微小管リモデリング、オリゴデンドロサイト生物学、ならびに細胞骨格制御と神経疾患表現型を結び付ける機構を研究するうえで有用な標的となります。

TPPP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TPPPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TPPP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TPPP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTPPP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TPPPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTPPP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTPPP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTPPP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTPPP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。