Tom70 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402022-NIC

TOMM70 は、ミトコンドリア外膜のインポート受容体である Tom70 をコードしており、細胞質の前駆タンパク質やシャペロンに結合した疎水性キャリアを認識して、それらを TOM 複合体へ受け渡し、ミトコンドリア内への移行を協調的に進めます。呼吸鎖構成因子の生合成やミトコンドリアのタンパク質恒常性（プロテオスタシス）を支えることで、Tom70 は酸化的リン酸化能、オルガネラ動態、細胞のストレス適応に寄与します。TOMM70 の機能変化は、ミトコンドリア機能不全や神経変性の文脈で研究されており、さらに MAVS 依存性の抗ウイルス経路と相互作用する輸入因子の利用可能性や配置を調節することで、ミトコンドリアにおける自然免疫シグナル伝達にも影響し得ます。これらの特性により、TOMM70 は、ミトコンドリアのタンパク質輸入、代謝リモデリング、そして複雑な疾患表現型に関わるストレス応答回路を検討するための有用な標的となります。

Tom70 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TOMM70 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TOMM70内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TOMM70の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TOMM70が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。