Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Tom1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423467
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Tom1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Tom1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Tom1 Anticuerpo (H-5): sc-514430
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Tom1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423467 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Tom1 (diana de Myb1) codifica una proteína adaptadora endosomal que acopla carga ubiquitinada a la maquinaria de tráfico asociada a ESCRT, contribuyendo a la maduración del endosoma y a la clasificación hacia lisosomas. Mediante interacciones con componentes relacionados con la clatrina y con ESCRT, TOM1 ayuda a regular el recambio de receptores, la homeostasis de proteínas de membrana y la atenuación de la señalización tras la endocitosis. Estos procesos se cruzan con la función del eje autofagia–lisosoma y con la señalización inmunitaria innata, lo que hace que Tom1 sea relevante para estudiar cómo el transporte vesicular modula la inflamación y las respuestas celulares al estrés. La clasificación endosomal alterada y el tráfico dependiente de ubiquitina se asocian con frecuencia a fenotipos neuroinflamatorios y neurodegenerativos, así como a desregulación inmunitaria en modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Tom1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tom1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tom1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tom1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Tom1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tom1 para la investigación de la señalización de Tom1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Tom1 críticos para la función de Tom1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tom1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Tom1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Tom1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tom1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Tom1 (m) y el plásmido HDR Tom1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tom1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tom1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.