TNF-R2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423443

Übersicht

Tnfrsf1b kodiert TNF‑R2 (TNFRSF1B), einen TNF‑Rezeptor, der vorwiegend auf Immunzellen, Endothelzellen und bestimmten stromalen Zellpopulationen exprimiert wird und bevorzugt auf membrangebundenes TNF anspricht. Die Signalübertragung über TNF‑R2 rekrutiert Adapterproteine zur Regulation der Aktivität der NF‑κB‑ und MAPK‑Signalwege und prägt dadurch Programme für Zellüberleben, Zytokinantworten und Gewebeumbau. In der Lymphozytenbiologie ist TNF‑R2 eng mit der Stabilität regulatorischer T‑Zellen sowie mit aktivierungsinduzierten Signalen verknüpft, die das entzündliche Gleichgewicht modulieren. Eine fehlregulierte Aktivität der TNF‑R2‑Achse wurde in Modellen chronischer Entzündung, Autoimmunität und neuroinflammatorischer Prozesse beschrieben und macht sie zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Spezifität von TNF‑Signalwegen.

Das TNF-R2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnfrsf1b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnfrsf1b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnfrsf1b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TNF-R2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnfrsf1b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TNF-R2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnfrsf1b-Exone abzielen, die für die TNF-R2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnfrsf1b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TNF-R2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TNF-R2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnfrsf1b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TNF-R2 HDR-Plasmid (m) und TNF-R2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnfrsf1b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnfrsf1b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.