Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TNFβ Double Nickase Plasmid (h): sc-403005-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TNFβ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TNFβ Double-Nickase-Plasmid (h) und TNFβ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LTA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TNFβ: sc-28345
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TNFβ Double Nickase Plasmid (h) | sc-403005-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TNFβ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403005-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane **LTA**-Gen kodiert Lymphotoxin-α (TNFβ), ein Zytokin der TNF-Superfamilie, das vor allem von aktivierten Lymphozyten produziert wird und über **TNFR1/TNFR2** sowie – in membranassoziierten Komplexen mit **LTβ** – über den **LTβR** signalisiert. TNFβ aktiviert die kanonischen **NF-κB**- und **MAPK**-Signalwege, um die Expression entzündungsrelevanter Gene, das Zellüberleben und die Apoptose sowie die Organisation der Mikroumgebungen lymphatischen Gewebes zu regulieren. Es trägt zur Kommunikation zwischen Immunzellen und Stromazellen, zur Endothelaktivierung und zu Zytokinnetzwerken bei, die adaptive Immunantworten prägen. Eine fehlregulierte LTA-Signalübertragung wurde mit chronischer Entzündung und immunvermittelten Pathologien in Verbindung gebracht, ebenso wie mit Tumor–Immun-Interaktionen in der Mikroumgebung.
TNFβ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LTA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LTA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LTA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LTA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.