TIP39 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405791

Übersicht

Parathormon 2 (PTH2) kodiert das tuberoinfundibuläre Peptid mit 39 Aminosäureresten (TIP39), ein Neuropeptid, das als endogener Ligand des Parathormonrezeptors 2 (PTH2R) fungiert, eines GPCR der Klasse B. Die TIP39–PTH2R-Signalübertragung koppelt überwiegend an cAMP/PKA und kann calciumabhängige Signalwege einbeziehen, wodurch neuronale Erregbarkeit und neuroendokrine Outputs in hypothalamischen und limbischen Schaltkreisen geprägt werden. In der menschlichen Biologie wird PTH2/TIP39 mit der Modulation von Nozizeption, Stressreaktionen, Thermoregulation und der Kontrolle der Reproduktionsachse über neuropeptiderge Kommunikation in Verbindung gebracht. Eine Dysregulation dieser Signalwege liefert einen mechanistischen Rahmen für die Untersuchung sensorischer Verarbeitung und neuroendokriner Phänotypen in krankheitsrelevanten Modellen.

Das TIP39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PTH2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PTH2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PTH2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TIP39-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PTH2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TIP39-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PTH2-Exone abzielen, die für die TIP39-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PTH2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TIP39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TIP39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PTH2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TIP39 HDR-Plasmid (h) und TIP39 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PTH2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PTH2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.