TIM-3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416365-LAC

HAVCR2 codifica la proteina 3 contenente domini immunoglobulinici e mucinici delle cellule T (TIM-3), un recettore immunoregolatorio espresso sulle cellule T attivate e su altri sottotipi immunitari, che contribuisce a modulare la funzione effettrice, l’esaurimento e la tolleranza periferica. La segnalazione di TIM-3 si integra con i meccanismi di controllo dei checkpoint e con i circuiti infiammatori, influenzando la produzione di citochine, le risposte antigene-specifiche e l’equilibrio tra attivazione e soppressione immunitaria. Un’attività deregolata di HAVCR2/TIM-3 è stata associata a infezioni croniche e a disfunzione immunitaria correlata ai tumori, ed è inoltre implicata in contesti di malattie autoimmuni e infiammatorie attraverso i suoi effetti sulla differenziazione delle cellule T e sul crosstalk con le cellule mieloidi. Queste caratteristiche rendono HAVCR2 un bersaglio rilevante per analizzare i meccanismi di evasione immunitaria, la perdita di tolleranza e le transizioni di stato delle cellule immunitarie.

Le particelle di attivazione lentivirale TIM-3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HAVCR2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TIM-3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HAVCR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TIM-3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HAVCR2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.