Thrombospondin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400436-ACT

THBS1 codifica a trombospondina 1, uma glicoproteína matricelular secretada que regula a remodelação da matriz extracelular, a adesão célula–matriz e a migração celular por meio de interações com integrinas, CD36 e CD47. Ela modula o equilíbrio angiogênico e a sinalização inflamatória e é um importante ativador de TGF-β latente, conectando o THBS1 a vias que controlam fibrose, reparo de feridas e recrutamento de células imunes. A expressão alterada de THBS1 tem sido associada à remodelação vascular desregulada e a respostas estromais na biologia do câncer, bem como a mecanismos de doença fibrótica e cardiovascular. Essas propriedades fazem de THBS1 um nó útil para estudar o controle microambiental da homeostase tecidual e das respostas ao estresse.

Thrombospondin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de THBS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Thrombospondin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus THBS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição THBS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Thrombospondin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus THBS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Thrombospondin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Thrombospondin 1 em células tumorais com expressão de THBS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.