THP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401238-ACT

UMODはウロモジュリン（THP）をコードしており、THPは正常ヒト尿中に分泌される糖タンパク質として最も豊富で、ヘンレ係蹄太い上行脚の上皮細胞が産生する代表的な産物です。THPは小胞体で合成され、広範な糖鎖修飾およびGPIアンカー付加を受けたのち、管腔側（頂端側）へ放出され、尿細管の恒常性、タンパク質凝集、ならびに尿中のイオンや微生物との相互作用に影響を与えます。UMODの発現とタンパク質成熟は、小胞体の品質管理やゴルジ体を介した輸送などの上皮細胞のプロテオスタシス経路と関連しており、腎尿細管微小環境における炎症シグナルを調節し得ます。遺伝的多型やUMOD発現の制御異常は、腎疾患感受性や尿細管間質病変と関連することから、腎上皮機能およびストレス応答を研究するうえで有用な座位です。

THP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UMODの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

THP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UMOD 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUMOD転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性THPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUMOD遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTHP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUMOD発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTHP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。