THOC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403390

Panoramica

THOC1 codifica una subunità centrale del complesso THO/TREX, che accoppia la trascrizione alla maturazione dell’mRNA e all’esportazione nucleare coordinando l’assemblaggio co-trascrizionale delle ribonucleoproteine messaggere (mRNP). Attraverso interazioni con l’RNA polimerasi II e con i fattori di esportazione, THOC1 favorisce la maturazione dei trascritti a livello genomico, tutela l’omeostasi degli R-loop e contribuisce a mantenere l’integrità della replicazione e della trascrizione. L’alterazione dell’esportazione di RNA dipendente da THOC1 può perturbare la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress, collegando questo fattore a vie che influenzano la stabilità del genoma. Un’espressione alterata di THOC1 e la disfunzione del complesso TREX sono state osservate in diversi contesti legati al cancro e in studi sui disturbi del metabolismo dell’RNA, rendendo THOC1 un nodo utile per indagini meccanicistiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO THOC1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene THOC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del THOC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto THOC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina THOC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di THOC1 per lo studio della segnalazione di THOC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni THOC1 critici per la funzione di THOC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di THOC1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal THOC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal THOC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus THOC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal THOC1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR THOC1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia THOC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio THOC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.