TGN38 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401763-ACT

TGOLN2 kodiert TGN38, ein Typ‑I‑transmembranes Glykoprotein, das im trans‑Golgi‑Netzwerk angereichert ist und als Sortier‑ und Transportfaktor für Membran‑ und sekretorische Fracht dient. Über zytosolische Targeting‑Motive und Interaktionen mit Adapterproteinen trägt TGN38 zur Vesikelknospung, zum Recycling von Endosomen zum TGN sowie zur Aufrechterhaltung der Golgi‑Architektur bei und beeinflusst dadurch die Proteinreifung und die räumliche Organisation von Signalrezeptoren. Diese Prozesse verknüpfen TGOLN2 mit zentralen Signalwegen des intrazellulären Transports, der Glykoproteinprozessierung und der regulierten Sekretion. Fehlregulierter Membrantransport und gestörte Golgi‑Homöostase sind an Krebszellinvasion, Neurodegeneration und Veränderungen der Immun‑Signalübertragung beteiligt, was TGOLN2 zu einem hilfreichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Organell‑Dynamik und Proteostase macht.

TGN38 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TGOLN2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TGN38 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TGOLN2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TGOLN2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TGN38-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TGOLN2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TGN38-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TGN38-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TGOLN2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.