TGF beta 1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423364-ACT

マウスのTgfb1は、トランスフォーミング増殖因子β1（TGFβ1）をコードする。TGFβ1は分泌型サイトカインであり、主にTGFBR1/2を介してシグナルを伝達し、SMAD2/3依存的な転写を活性化するとともに、非カノニカルなMAPK、PI3K/AKT、Rho GTPase経路ともクロストークする。TGFβ1は、細胞外マトリックス（ECM）リモデリング、上皮間葉転換（EMT）、免疫細胞分化、ならびに組織恒常性の維持を担う中心的な調節因子である。Tgfb1活性の異常は、線維化リモデリング、過剰な免疫抑制または炎症、創傷治癒不全、腫瘍—間質相互作用などに広く関与する。マウスモデルでは、Tgfb1の攪乱は、間質シグナル伝達、マクロファージおよびT細胞の極性化、さらに発生や疾患様表現型における状況依存的な増殖制御を検討するために広く用いられている。

TGF beta 1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tgfb1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TGF beta 1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Tgfb1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTgfb1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TGF beta 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTgfb1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTGF beta 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTgfb1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTGF beta 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。