TGase3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406800

Übersicht

TGM3 kodiert die Transglutaminase 3 (TGase3), ein calciumabhängiges Enzym, das die Quervernetzung von Proteinen durch die Bildung von ε-(γ-Glutamyl)lysin-Isopeptidbindungen katalysiert. TGase3 ist vor allem für ihre Rolle in Programmen der terminalen Differenzierung bekannt und trägt zur Stabilisierung des Zytoskeletts sowie extrazellulärer Proteinassemblierungen während der epithelialen Reifung und Barrierebildung bei. Ihre Aktivität greift in Signalwege ein, die die Keratinozytendifferenzierung, die Wundheilung und den Umbau struktureller Proteine steuern, und verknüpft damit enzymatische Quervernetzung mit der Gewebehomöostase. Eine fehlregulierte Transglutaminase-Aktivität und eine veränderte TGM3-Expression wurden mit entzündlichen und neoplastischen Prozessen in epithelialen Geweben in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von TGase3 in krankheitsrelevanten Differenzierungszuständen und in der Tumorbiologie unterstützt.

Das TGase3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TGM3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TGM3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TGM3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TGase3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TGM3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TGase3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TGM3-Exone abzielen, die für die TGase3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TGM3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TGase3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TGase3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TGM3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TGase3 HDR-Plasmid (h) und TGase3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TGM3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TGM3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.