Plasmide CRISPR/Cas9 KO tetranectin (m): sc-423429

Présentation

Le gène murin Clec3b code la tétranectine, une protéine sécrétée de type lectine C, présente dans les fluides extracellulaires et dans des compartiments associés à la matrice. La tétranectine se lie au plasminogène et a été associée à la régulation de la protéolyse péricellulaire, de la fibrinolyse et du remodelage de la matrice extracellulaire, des processus qui influencent la migration cellulaire et la réparation tissulaire. Par ses interactions avec les systèmes protéasiques et les composants de la matrice, la tétranectine peut moduler les microenvironnements inflammatoires et stromaux et a été étudiée dans le contexte de l’invasion tumorale, de la cicatrisation et du remodelage fibrotique. Des altérations de l’expression de CLEC3B ou de l’abondance de la protéine ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier l’équilibre protéolytique et la dynamique de la matrice.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO tetranectin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Clec3b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Clec3b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Clec3b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine tetranectin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Clec3b pour l'étude de la signalisation de tetranectin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Clec3b essentiels à la fonction de tetranectin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Clec3b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le tetranectin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le tetranectin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Clec3b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le tetranectin plasmide HDR (m) et le tetranectin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Clec3b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Clec3b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.