Plasmide CRISPR/Cas9 KO TET1 (h): sc-400845

Présentation

TET1 (ten-eleven translocation methylcytosine dioxygénase 1) est une dioxygénase dépendante du Fe(II) et du 2‑oxoglutarate qui catalyse l’oxydation de la 5‑méthylcytosine en 5‑hydroxyméthylcytosine, ainsi qu’en dérivés davantage oxydés, contribuant à la déméthylation active de l’ADN et au remodelage épigénétique. Par ses interactions avec des régulateurs transcriptionnels et des complexes associés à la chromatine, TET1 participe à façonner les états de méthylation des promoteurs et des enhancers, lesquels influencent l’identité cellulaire, la différenciation et la stabilité du génome. Les modifications des paysages de 5hmC liées à TET1 ont été associées à des programmes d’expression génique dérégulés en contexte cancéreux et neurodéveloppemental, et sont fréquemment étudiées aux côtés d’autres acteurs de la machinerie de méthylation de l’ADN, tels que les DNMT, ainsi que des voies métaboliques dépendantes d’IDH. À l’interface entre « écriture » et « effacement » épigénétiques, TET1 est largement utilisée pour étudier le contrôle, dépendant de la méthylation, des réseaux de signalisation et de la transcription spécifique de lignée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TET1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TET1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TET1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TET1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TET1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TET1 pour l'étude de la signalisation de TET1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TET1 essentiels à la fonction de TET1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TET1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TET1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TET1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TET1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TET1 plasmide HDR (h) et le TET1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TET1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TET1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.