Plásmido CRISPR de Activación (h) Tenomodulin: sc-401145-ACT

TNMD codifica la tenomodulina, una glucoproteína transmembrana de tipo II enriquecida en tendón, ligamento y otros tejidos conectivos densos, donde contribuye a la homeostasis de la matriz extracelular y a la maduración tisular. La tenomodulina se asocia con programas de diferenciación tenogénica y participa en la regulación de la adhesión celular, la fibrilogénesis del colágeno y los procesos de remodelación que se solapan con la señalización profibrótica impulsada por TGF-β. La alteración de la expresión de TNMD se ha relacionado con una cicatrización deficiente del tendón, tendinopatías y degeneración del tejido conectivo musculoesquelético, y con frecuencia se estudia junto con vías relacionadas con la angiogénesis debido a la actividad antiangiogénica descrita para dominios de la tenomodulina. Estas propiedades convierten a TNMD en una diana útil para estudiar la especificación del linaje de fibroblastos, respuestas de remodelación vinculadas a la mecanotransducción y una biología de la matriz relevante para la enfermedad en modelos celulares humanos.

Tenomodulin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TNMD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Tenomodulin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TNMD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TNMD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Tenomodulin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TNMD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Tenomodulin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Tenomodulin en células tumorales con expresión de TNMD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.