Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tenascin-C (m): sc-423430

Présentation

Tnc code la glycoprotéine de la matrice extracellulaire tenascine-C, une protéine matricellulaire fortement régulée qui module les interactions cellule–matrice au cours du développement, du remodelage tissulaire et de l’inflammation. La tenascine-C influence l’adhésion et la migration en interagissant avec les intégrines, la fibronectine et les protéoglycanes, et elle ajuste la mécanotransduction ainsi que la signalisation des facteurs de croissance au sein de la niche stromale. Elle est fréquemment induite par des signaux associés aux lésions et participe à des processus tels que les transitions épithélio-mésenchymateuses, le remodelage angiogénique et le recrutement des leucocytes. Une expression dérégulée de la tenascine-C a été associée à la fibrose, à des microenvironnements inflammatoires chroniques et au remodelage stromal lié aux tumeurs, ce qui fait de Tnc une cible utile pour étudier les programmes de signalisation pilotés par la matrice extracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tenascin-C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tenascin-C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnc pour l'étude de la signalisation de Tenascin-C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnc essentiels à la fonction de Tenascin-C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Tenascin-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Tenascin-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Tenascin-C plasmide HDR (m) et le Tenascin-C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.