TCP-1 ζ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403047-ACT

CCT6Aは、ヒトのシャペロニン含有TCP-1サブユニットζ（TCP-1 ζ）をコードしており、細胞質のTRiC/CCT複合体を構成する中核成分の一つです。TRiC/CCTはATP依存的にアクチンやチューブリン、さらにプロテオスタシス維持に必要な各種クライアントタンパク質のフォールディングを担います。タンパク質品質管理における役割を通じて、TCP-1 ζは細胞骨格の構築、細胞周期の進行、ストレス応答性の恒常性を支え、その下流で有糸分裂紡錘体の完全性や細胞内輸送などの過程に影響を及ぼします。TRiC/CCTサブユニットの攪乱は、増殖や生存に関連するシグナル伝達ネットワークを再編し得るほか、CCT6Aの発現変化は、がん関連表現型やプロテオスタシス破綻を含む複数の疾患関連状況で報告されています。そのためCCT6Aは、シャペロン機能容量、細胞骨格ダイナミクス、ストレス下での細胞の健全性を結び付ける経路の研究で、しばしば注目されています。

TCP-1 ζ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCT6Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TCP-1 ζ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCT6A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCT6A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TCP-1 ζの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCT6A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTCP-1 ζ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCT6A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTCP-1 ζ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。