Plasmide CRISPR/Cas9 KO TCP-1 γ (h): sc-403203

Présentation

CCT3 code la sous-unité gamma de la chaperonine humaine contenant TCP-1 (TCP-1 γ), un composant central du complexe cytosolique TRiC/CCT, qui assure le repliement dépendant de l’ATP d’un large ensemble de protéines clientes. TRiC/CCT soutient la protéostasie en favorisant la maturation de protéines du cytosquelette telles que l’actine et la tubuline, et en influençant le repliement et la stabilité de régulateurs de la signalisation et du cycle cellulaire. Par ces fonctions, TCP-1 γ contribue à l’organisation du cytosquelette, au contrôle qualité des protéines et à la capacité proliférative ; des perturbations de la fonction des chaperonines sont associées au stress protéotoxique et à une altération des signaux de croissance. Une expression dérégulée des sous-unités CCT a été rapportée dans de nombreux contextes pathologiques, ce qui étaye l’étude de ce complexe dans des voies pertinentes pour la transformation oncogénique et le mauvais repliement protéique associé à la neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TCP-1 γ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCT3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCT3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TCP-1 γ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCT3 pour l'étude de la signalisation de TCP-1 γ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CCT3 essentiels à la fonction de TCP-1 γ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCT3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TCP-1 γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TCP-1 γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCT3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TCP-1 γ plasmide HDR (h) et le TCP-1 γ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCT3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCT3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.