TCF-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401584

Übersicht

TCF7 kodiert TCF-1, einen auf T‑Zellen beschränkten HMG-Box-Transkriptionsfaktor, der die kanonische Wnt/β‑Catenin-Signalübertragung mit linienspezifischen Genprogrammen verknüpft. TCF-1 prägt die Entwicklung von Thymozyten, unterstützt die Aufrechterhaltung von T‑Zell‑Vorläufern und steuert Differenzierungsentscheidungen durch kontextabhängige transkriptionelle Aktivierung oder Repression in Zusammenarbeit mit Kofaktoren wie β‑Catenin und Groucho/TLE. In reifen Lymphozyten beeinflusst TCF-1 Effektor‑ gegenüber Gedächtnis-assoziierten Zuständen und trägt zu Chromatin‑ und Transkriptionsnetzwerken bei, die die Immunhomöostase regulieren. Eine Fehlregulation von TCF7/TCF-1‑abhängigen Programmen wurde mit veränderter Differenzierung von Immunzellen in Verbindung gebracht und wird im Kontext immunvermittelter Pathologien sowie der mit hämatologischen Malignomen assoziierten transkriptionellen Umprogrammierung untersucht.

Das TCF-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TCF7-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TCF7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TCF7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TCF-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TCF7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TCF-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TCF7-Exone abzielen, die für die TCF-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TCF7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TCF-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TCF-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TCF7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TCF-1 HDR-Plasmid (h) und TCF-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TCF7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TCF7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.