TAUT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402918

Übersicht

SLC6A6 kodiert den Taurin-Transporter TAUT, einen natrium- und chloridabhängigen Membrantransporter, der die intrazellulären Taurinreserven aufrechterhält, die für osmotische Homöostase, die Calciumhandhabung und den zellulären Schutz vor oxidativem Stress sowie ER-Stress erforderlich sind. Die TAUT-vermittelte Taurinaufnahme unterstützt die mitochondriale Funktion, die Stabilisierung von Membranen und Signalprozesse, die das Überleben, die Differenzierung und die Volumenregulation von Zellen in erregbaren wie nicht erregbaren Geweben beeinflussen. Eine veränderte SLC6A6-Aktivität und Taurinverfügbarkeit wurden mit erhöhter Anfälligkeit für zellulären Stress und Funktionsstörungen in Systemen wie Retina, Herz, Niere und Nervengewebe in Verbindung gebracht und sind damit relevant für Studien zur Neurobiologie, kardiometabolischen Regulation und zu entzündlichen Stressantworten. Als Teil von Transportnetzwerken der Solute-Carrier-Familie steht TAUT zudem in Wechselwirkung mit Signalwegen, die Ionengradienten, das Redoxgleichgewicht und stressadaptive Genprogramme steuern.

Das TAUT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC6A6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC6A6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC6A6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TAUT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC6A6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TAUT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC6A6-Exone abzielen, die für die TAUT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC6A6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TAUT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TAUT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC6A6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TAUT HDR-Plasmid (h) und TAUT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC6A6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC6A6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.