TALK-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406360

Descripción general

KCNK16 codifica TALK-1 (K2P16.1), un canal de potasio de dos poros (K2P) que contribuye a la conductancia basal de K⁺ y establece el potencial de membrana en reposo en células excitables y secretoras. Al regular la excitabilidad de la membrana, TALK-1 influye en la entrada de Ca²⁺ dependiente de voltaje y en las vías de señalización posteriores acopladas a Ca²⁺, que moldean el acoplamiento estímulo–secreción y las respuestas celulares al estrés. El canal está enriquecido en los islotes pancreáticos, donde las alteraciones del flujo de K⁺ pueden modular la actividad eléctrica de las células β y la dinámica de liberación de insulina. Estudios genéticos y funcionales han vinculado la actividad de KCNK16/TALK-1 con rasgos metabólicos, lo que lo hace relevante para la investigación mecanística en la señalización asociada a la diabetes y la fisiología de los canales iónicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TALK-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNK16 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNK16 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNK16 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TALK-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNK16 para la investigación de la señalización de TALK-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNK16 críticos para la función de TALK-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNK16 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TALK-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TALK-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNK16. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TALK-1 (h) y el plásmido HDR TALK-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNK16 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNK16 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.