TACC3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402461-ACT

Humanes TACC3 (transforming acidic coiled-coil containing protein 3) ist ein am Zentrosom und an der Spindel lokalisierter Faktor, der die Mikrotubuli-Dynamik koordiniert und damit den Aufbau der mitotischen Spindel, die Chromosomentrennung und einen zuverlässigen Zellzyklusverlauf unterstützt. Durch Interaktionen mit Partnern wie Clathrin und chTOG trägt TACC3 zur Stabilisierung von Mikrotubuli und zur Integrität der Spindel bei und verknüpft seine Funktion mit der Kontrolle des mitotischen Checkpoints und der genomischen Stabilität. Eine dysregulierte TACC3-Expression oder -Rearrangements wurden in mehreren Tumorkontexten beobachtet und werden häufig im Zusammenhang mit proliferativen Signalwegen, chromosomaler Instabilität und veränderten mitotischen Programmen untersucht. Diese Eigenschaften machen TACC3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Erforschung der Zellteilungsbiologie, von Aneuploidie-Mechanismen und von Signalwegabhängigkeiten, die mit schneller Proliferation einhergehen.

TACC3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TACC3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TACC3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TACC3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TACC3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TACC3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TACC3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TACC3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TACC3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TACC3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.