Partículas Lentivirales de Activación (h) T1R2: sc-402555-LAC

TAS1R2 codifica la subunidad del receptor humano del sabor dulce T1R2, un GPCR de clase C que forma un heterodímero con T1R3 para detectar azúcares y edulcorantes. Más allá del gusto oral, T1R2 se expresa en tejidos extraorales como el epitelio gastrointestinal y el páncreas, donde contribuye a la detección de nutrientes y se acopla a la señalización de GPCR que modula la dinámica del calcio intracelular y procesos dependientes de AMPc. A través de estas vías, T1R2 puede influir en la secreción y en respuestas metabólicas vinculadas al manejo de la glucosa y a la señalización enteroendocrina. La alteración de la expresión de TAS1R2 o de la función del receptor se ha investigado en el contexto de fenotipos metabólicos, incluidos la obesidad y rasgos relacionados con la diabetes, así como en aspectos más amplios de la biología quimiosensorial y del eje intestino–cerebro.

Las partículas de activación lentiviral T1R2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TAS1R2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral T1R2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TAS1R2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de T1R2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TAS1R2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.