T-FABP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423411

Descripción general

Fabp9 codifica la proteína testicular de unión a ácidos grasos (T-FABP), una chaperona lipídica implicada en el transporte intracelular de ácidos grasos de cadena larga y otros ligandos hidrofóbicos en la línea germinal masculina. Al regular la captación, el secuestro y la entrega de ácidos grasos a enzimas metabólicas y membranas, T-FABP se vincula con vías de homeostasis lipídica que influyen en la β-oxidación mitocondrial, la remodelación de membranas y el equilibrio redox durante la espermatogénesis. La alteración de la actividad de la familia FABP se asocia de forma amplia con desregulación metabólica y señalización inflamatoria, y Fabp9 se estudia habitualmente en el contexto del desarrollo espermático, la motilidad y fenotipos relacionados con la fertilidad. En modelos de ratón, Fabp9 ofrece un punto de estudio manejable para investigar cómo el manejo de lípidos en células germinales afecta la biología reproductiva y la adaptación metabólica en respuesta al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO T-FABP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fabp9 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fabp9 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fabp9 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína T-FABP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fabp9 para la investigación de la señalización de T-FABP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fabp9 críticos para la función de T-FABP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fabp9 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido T-FABP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido T-FABP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fabp9. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR T-FABP (m) y el plásmido HDR T-FABP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fabp9 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fabp9 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.