Plasmide CRISPR/Cas9 KO SYP/Synaptophysin (m): sc-423242

Présentation

Syp code la synaptophysine (SYP), une glycoprotéine abondante de la membrane des vésicules synaptiques, largement utilisée comme marqueur présynaptique dans le système nerveux de la souris. La SYP participe au trafic des vésicules synaptiques, à l’exo-endocytose et au recyclage dépendant de l’activité via des interactions avec la machinerie de fusion vésiculaire et d’endocytose, contribuant ainsi au maintien de la capacité de libération des neurotransmetteurs. Des altérations de l’expression de la synaptophysine et de la dynamique des vésicules présynaptiques ont été associées à une perturbation de la connectivité synaptique et sont fréquemment examinées dans des études portant sur les mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs. En tant que composant central des terminaisons présynaptiques, la SYP constitue un point d’entrée fonctionnel pour analyser les changements au niveau des circuits qui résultent d’un cycle vésiculaire altéré.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SYP/Synaptophysin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Syp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Syp, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Syp à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SYP/Synaptophysin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Syp pour l'étude de la signalisation de SYP/Synaptophysin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Syp essentiels à la fonction de SYP/Synaptophysin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Syp pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SYP/Synaptophysin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SYP/Synaptophysin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Syp. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SYP/Synaptophysin plasmide HDR (m) et le SYP/Synaptophysin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Syp pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Syp définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.