SYP/Synaptophysin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423242

概要

Syp は、マウス神経系においてシナプス前部マーカーとして広く用いられている、シナプス小胞膜糖タンパク質の主要成分であるシナプトフィジン（SYP）をコードする遺伝子です。SYP は、小胞融合およびエンドサイトーシス機構との相互作用を通じて、シナプス小胞の輸送、エキソ／エンドサイトーシス、ならびに活動依存的なリサイクリングに関与し、神経伝達物質放出能の維持に寄与します。シナプトフィジン発現の変化やシナプス前小胞ダイナミクスの異常は、シナプス結合性の破綻と関連づけられており、神経発達および神経変性のメカニズム研究で頻繁に評価されます。シナプス前終末の中核構成要素として、SYP は小胞サイクリング障害に起因して生じる回路レベルの変化を解析するための機能的な切り口を提供します。

SYP/Synaptophysin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSyp遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Syp内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sypのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SYP/Synaptophysinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SYP/Synaptophysinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Syp欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SYP/Synaptophysinの機能に不可欠なSypエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sypゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SYP/Synaptophysin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSYP/Synaptophysin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Syp遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SYP/Synaptophysin HDRプラスミド（m）および SYP/Synaptophysin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSypホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSyp標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。