Plasmide CRISPR/Cas9 KO Syne-1 (h): sc-402804

Présentation

SYNE1 code la synéine‑1 (nesprine‑1), une grande protéine d’échafaudage riche en répétitions de spectrine du complexe LINC, qui couple le noyau au cytosquelette via des interactions avec les protéines SUN, l’actine et les filaments intermédiaires. En régulant le positionnement nucléaire, la mécanotransduction et l’organisation du cytosquelette, la synéine‑1 influence des processus tels que la migration cellulaire, la polarité et l’architecture tissulaire. Des altérations de SYNE1 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, notamment l’ataxie cérébelleuse autosomique récessive, et ont également été rapportées dans des études de génomique des cancers, où un couplage noyau‑cytosquelette modifié peut affecter la stabilité du génome et le comportement cellulaire. Ces caractéristiques font de SYNE1 une cible pertinente pour étudier la biologie de l’enveloppe nucléaire, la transmission des forces et des phénotypes cellulaires associés aux maladies dans des systèmes modèles humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Syne-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SYNE1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SYNE1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SYNE1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Syne-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SYNE1 pour l'étude de la signalisation de Syne-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SYNE1 essentiels à la fonction de Syne-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SYNE1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Syne-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Syne-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SYNE1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Syne-1 plasmide HDR (h) et le Syne-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SYNE1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SYNE1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.