Plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptoporin (m): sc-428189

Présentation

Synpr code la synaptoporine, une protéine membranaire des vésicules synaptiques enrichie dans les terminaisons présynaptiques des neurones de souris et apparentée à la famille des synaptophysines. La synaptoporine contribue à la biogenèse et au recyclage des vésicules synaptiques, en influençant la libération des neurotransmetteurs et la plasticité synaptique à court terme via un trafic dépendant de l’activité et le couplage endocytose/exocytose. Elle est fréquemment étudiée dans le contexte des circuits hippocampiques et glutamatergiques, où la dynamique vésiculaire façonne l’excitabilité des réseaux. Des modifications de la composition des protéines vésiculaires présynaptiques, y compris des voies associées à la synaptoporine, sont pertinentes pour l’étude des mécanismes des maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives, sans préjuger d’issues cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptoporin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Synpr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Synpr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Synpr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Synaptoporin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Synpr pour l'étude de la signalisation de Synaptoporin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Synpr essentiels à la fonction de Synaptoporin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Synpr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Synaptoporin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Synaptoporin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Synpr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Synaptoporin plasmide HDR (m) et le Synaptoporin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Synpr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Synpr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.