Plásmido Doble Nickase (m) Synapsin IIa: sc-423234-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Synapsin IIa consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Synapsin IIa (m) y el plásmido de doble nickasa Synapsin IIa (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Syn2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Synapsin IIa Anticuerpo (1): sc-136086
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Synapsin IIa | sc-423234-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Synapsin IIa | sc-423234-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Syn2 del ratón codifica la sinapsina IIa, una fosfoproteína asociada a las vesículas sinápticas que regula la liberación de neurotransmisores al anclar las vesículas al citoesqueleto de actina y controlar su movilización desde el pool de reserva. La función de la sinapsina IIa está modulada por fosforilación dependiente de la actividad, aguas abajo de quinasas como PKA, CaMKs y MAPK/ERK, lo que vincula la actividad neuronal con la plasticidad presináptica y el ciclo de las vesículas. A través de su papel en la sinaptogénesis y en la dinámica sináptica a corto plazo, Syn2 contribuye al mantenimiento del equilibrio entre circuitos excitadores e inhibidores. La desregulación de las vías de las sinapsinas se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que convierte a Syn2 en un objetivo relevante para estudiar los mecanismos que subyacen a una transmisión sináptica alterada.
Synapsin IIa El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Syn2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Syn2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Syn2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Syn2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.